Реєстраційний номер
0221U000219,
0117U000657
, Науково-дослідна робота
Назва роботи
Дослідження механізмів пригнічення пухлинного росту шляхом обмеження вуглеводного живлення, гальмування гліколізу, глюконеогенезу та індукції голодування за аргініном
Назва етапу роботи
Керівник роботи
Сибірний Андрій Андрійович,
Дата реєстрації
03-01-2021
Організація виконавець
Інститут біології клітини НАН України
Опис етапу
Проведено клонування гена CYB2, що кодує флавоцитохром b2 у дріжджів Ogataea polymorpha, на векторах індуктивних систем експресії з включенням у структуру рекомбінантного білка (His)6-фрагмента.
Сконструйовано рекомбінантний надпродуцент (His)6-тегованої форми флавоцитохрому b2 дріжджів O. polymorpha на основі клітин Escherichia coli з продуктивністю 25-50 мг/л культури.
Опрацьовано одноетапний метод виділення та очищення рекомбінантного флавоцитохрому b2 з клітин E. coli у вигляді тіл включення та отримано ренатурований каталітично активний препарат фермента з питомою активністю 1-2 мкмоль·хв-1∙мг-1 білка після солюбілізації тіл включення та рефолдингу у присутності 0,3% N-лауроїлсаркозину або 0,1% додецилсульфату натрію.
Отримано препаративні кількості очищеного флавоцитохрому b2 з клітин рекомбінантних штамів дріжджів O. polymorpha (безклітинні екстракти) та бактерій E. coli (солюбілізовані тільця включення).
Одержано високоочищений препарат аргінази І людини з клітин дріжджового рекомбінантного надпродуцента - штама S. cerevisiae.. Для детекції L-Arg використано розроблений нами раніше біензиматичний флуориметричний метод, який ґрунтується на реакції взаємодії сечовини (продукту розщеплення L-Arg аргіназою І) з 2,3-бутандіонмонооксимом. Комерційна уреаза служила для гідролізу ендогенної сечовини. Опрацьованому методу властива висока порогова чутливість визначення L-Arg (45 нМ), а також широкий діапазон лінійності 57 нМ – 0,2 мМ.
Проведено ензиматичний аналіз вмісту глюкози, молочної кислоти та L-аргініну із використанням виділених нами рекомбінантних ферментів (флавоцитохрому b2 та аргінази І) у крові тварин з перевиваними пухлинами за умов гальмування гліколізу та/або глюконеогенезу.
За результатами НДР у 2020 р. опубліковано 9 робіт (7 міжнародних статей, 2 розділи у міжнародних монографіях) та 2 тез доповідей. Сумарний імпакт-фактор публікацій – 19,70.
Опис продукції
Автори роботи
Іваш Марія Федорівна
Гайда Галина Зуфарівна
Демків Ольга Михайлівна
Закальська Оксана Мирославівна
Закальський Андрій Євстахович
Прокопів Тетяна Маркіянівна
Пшонюк Богдан Васильович
Серкіз Роман Ярославович
Смуток Олег Володимирович
Стасюк Наталія Євгенiвна
Додано/оновлено в НРАТ
2021-01-03
