Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0221U100522, 0120U103405 , Науково-дослідна робота Назва роботи Рекомбінантні штами дріжджів Komagataella phaffii, що продукують флавінові антибіотики амінорибофлавін та розеофлавін Назва етапу роботи Керівник роботи Сибірний Андрій Андрійович, Доктор біологічних наук Дата реєстрації 07-01-2021 Організація виконавець Інститут біології клітини НАН України Опис етапу  РЕФЕРАТ Звіт про НДР: 60 с., 35 рис., 9 табл., 37 джерел. Об’єкт дослідження: процес біосинтезу амінорибофлавіну та розеофлавіну з рибофлавіну та флавінмононуклеотиду. Мета дослідження: генна інженерія дріжджів Komagataella phaffii для одержання надпродуцентів флавінмононуклеотиду амінорибофлавіну та розеофлавіну. Мета етапу: Оптимізація умов максимального синтезу амінорибофлавіну та розеофлавіну сконструйованими штамами дріжджів K. рhaffii, розробка способів очищення та оцінка біологічної активності отриманих антибіотиків Методи дослідження: генно-інженерні, мікробіологічні, біохімічні За попередній етап роботи було сконструйовано рекомбінантні штами дріжджів K. рhaffii, що містили експресійні касети prTEF1-FMN1-prGAP-rosB та Y33-FMN1-rosB-rosA, які були здатні до нагромадження в культуральній рідині крім рибофлавіну інші флуоресціюючі сполуки, ймовірно амінорибофлавін та розеофлавін.. На даному етапі досліджень розроблено простий та ефективний метод очищення амінорибофлавіну, отримано його препаративні кількості та показано, що він проявляє помітну інгібуючу дію щодо деяких штамів бактерій Listeria monocytogenes ATCC 1913 , S. aureus ATCC 25923 та метицилін резистентних штамів S. aureus (MRSA). Встановлено, що трансформанти, які містять касету Y33-FMN1-rosB-rosA, продукують флавін рожевого кольору, який за допомогою спектрального аналізу (λmax = 505 нм), високоефективної рідинної хроматографії та мас-спектрометрії було ідентифіковано як розеофлавін. Оптимізовано умови культивування цих трансформантів у ферментері, проведено кількісний аналіз вмісту різних флавінів, розроблено простий та ефективний спосіб очистки розеофлавіну та отримано його у препаративних кількостях. В колбах сконструйований штам prTEF1-FMN1-prGAP1-rosB-prGAP1-rosA продукував 1,2 мг/л розеофлавіну. За умов культивування у лабораторному ферментері об’ємом 1 л, штам продукував 46 мг/л розеофлавіну. Ключові слова: ГЕННА ІНЖЕНЕРІЯ, ДРІЖДЖІ, KOMAGATAELLA PHAFFII, АМІНОРІБОФЛАВІН, РОЗЕ Опис продукції Автори роботи Дмитрук Костянтин Васильович Фаюра Любов Романівна Федорович Дарія Василівна Цирульник Андрій Олександрович Додано в НРАТ 2021-03-17 Закрити