Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0221U107074, 0121U113776 , Науково-дослідна робота Назва роботи Ідентифікація генів, що беруть участь у автофагічній деградації розчинних білків у дріжджах та клітинах людини Назва етапу роботи Керівник роботи Сибірний Андрій Андрійович, Доктор біологічних наук Дата реєстрації 26-12-2021 Організація виконавець Інститут біології клітини Національної академії наук України Опис етапу Розроблено систему селекції рекомбінантних штамів Komagatella phaffii з пошкодженням генів, пов’язаних з процесом автофагійної деградації цитозольних білків. Для цього ген LAC4 Kluyveromyces lactis, що кодує β-галактозидазу, експресовано під контролем метанол-індукованого промотора гена FLD1 у штамі K. phaffii GS200. На основі сконструйованого штаму GS200/LAC4 було отримано інсерційні мутанти, у яких сповільнено процес деградації β-галактозидази в порівнянні з вихідним штамом. В одного штаму було ідентифіковано сайт інтеграції інсерційної касети – інтеграція відбулася в районі відкритої рамки зчитування гена, що кодує β-1,6-N-ацетилглюкозамінілтрансферазу. Отримано рекомбінантний штам, похідний GS200/LAC4, з делецією цього гена. Дослідження швидкості деградації ферменту β-галактозидази у делеційного штаму GS200/LAC4/ΔβNA показало, що у даного штаму також сповільнені процеси автофагії, але швидкість їх проходження все ж залишається вищою ніж у отриманого на попередніх етапах роботи інсерційного мутанта GS200/LAC4/2.6.7. Також було визначено швидкість деградації нативних ферментів K. phaffii формальдегіддегідрогенези та форміатдегідрогенази, що розщеплюються шляхом автофагії. Сповільнена деградація нативних білків спостерігалась як у GS200/LAC4/2.6.7, так і у GS200/LAC4/ΔβNA порівняно з вихідним штамом GS200/LAC4. Проте, як і у випадку з β-галактозидазою, процеси автофагійної деградації нативних білків більш сповільнені у штаму GS200/LAC4/2.6.7. Це може свідчити про наявність у цього штаму інших мутацій, що впливають на процес автофагії у дріжджів. У людському геномі не виявлено генів, гомологічних ідентифікованому гену K. phaffii, але знайдено гени, що кодують ферменти з подібною функцією. Було здійснено сайленсинг трьох таких генів в культурі людських клітин HEK293, однак, на жаль, при цьому змін в процесах автофагійної деградації цитозольних білків у людських клітинах не спостерігалося. За результатами роботи опубліковано 1 статтю. Опис продукції Автори роботи Зазуля Анастасія Зіновіївна Семків Марта Віталіївна Додано в НРАТ 2022-03-09 Закрити