Реєстраційний номер
0224U000549,
0123U102365
, Науково-дослідна робота
Назва роботи
Кріоконсервування тривимірних клітинних структур різного ступеню гетерогенності на основі фізико-математичного моделювання
Назва етапу роботи
Керівник роботи
Сукач Олександр Миколайович, д.б.н.
Дата реєстрації
09-01-2024
Організація виконавець
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини Національної академії наук України
Опис етапу
Об'єкт дослідження – осмотичні характеристики гомогенних тривимірних клітинних структур (сфероїдів), отриманих з мезенхімальних стромальних клітини (МСК) дорослої людини і клітин лінії L929 та гетерогенних тривимірних клітинних структур (сфероїдів і агрегатів), отриманих з вихідних та прекультивуваних нейральних клітин новонароджених щурів. Мета роботи – на основі фізико-математичного моделювання процесів масопереносу та експериментальних даних визначити оптимальні параметри кріоконсервування (час інкубації в кріозахисному середовищі та швидкість охолодження) тривимірних клітинних структур різного ступеню гетерогенності (сфероїдів та агрегатів). Визначено, що формування як гомогенних (клітинами L929 чи МСК), так і гетерогенних (нейральними клітинами) сфероїдів у краплі, чи на не адгезивній поверхні відбувається протягом 3-5 діб культивування. При формування у краплі сфероїдів з МСК оптимальною концентрацією клітин є 3×103 - 5×103 клітин/краплю, об’ємом 30 мкл, а при формуванні сфероїдів з нейральних клітин оптимальною концентрацією є 12×103 - 20×103 клітин/краплю, об’ємом 20 мкл.За розрахунками фізико-математичного моделювання визначено, що оптимальним режимом кріоконсервування сфероїдів з клітин L929 є охолодження у присутності 10% ДМСО зі швидкістю 1,5-2 град/хв до -80º С з наступним зануренням у рідкий азот, а з МСК людини – охолодження зі швидкістю 0,75 град/хв в присутності 7.5% ДМСО до -40 °C з подальшим зануренням у рідкий азот. Також визначено, що оптимальний час еквілібрації з ДМСО сфероїдів з нейральних клітин складає: при 5о С – (146±20) с; при 15о С – (66±9) с; при 25о С – (60±6) с; при 35о С – (18±5) с. Оптимальний час еквілібрації з ДМСО агрегатів нейральних клітин складає: при 5о С – (119±16) с; при 15о С – (62±7) с; при 25о С – (34±6) с; при 35о С – (19±6) с. Оптимальна швидкість охолодження в присутності 10% ДМСО гетерогенних сфероїдів нейральних клітин знаходиться в межах 0,75 ÷ 1 град/хв.
Опис продукції
Автори роботи
Всеволодська Світлана Володимірівна
Коваленко Ігор Федорович
Коваленко Світлана Євген’євна
Оченашко Ольга Вадимівна
Сидоренко Ольга Сергіївна
Труфанов Олег Викторович
Додано/оновлено в НРАТ
2024-01-09
