Пошук академічних текстів

Реєстраційний номер

0224U032864, (0124U004341) , Науково-дослідна робота

Назва роботи

Вивчення механізмів дії нових генів, залучених в регуляцію синтезу рибофлавіну у флавіногенних дріжджів Candida famata

Назва етапу роботи

Дослідження механізмів зв’язування активатора транскрипції Sef1 з промоторами структурних генів біосинтезу рибофлавіну використовуючи дріжджову моногібридну систему

Керівник роботи

Федорович Дарія Василівна, д.б.н.

Дата реєстрації

09-12-2024

Організація виконавець

Інститут біології клітини Національної академії наук України

Опис роботи

Дослідити взаємодію раніше ідентифікованого фактору транскрипції Sef1 з промоторами структурних генів синтезу рибофлавіну. Ідентифікувати нові гени, залучені в регуляцію біосинтезу рибофлавіну у флавіногенних дріжджів Candida famata та вивчити механізми їх дії шляхом їх клонування та модифікації. Вивчити фенотипи отриманих штамів, а саме, нагромадження рибофлавіну, активності ферментів та експресію відповідних структурних генів, а також вміст феруму в клітинах.

Опис етапу

Проведено біоінформатичну роботу по пошуку та аналізу промоторів структурних генів біосинетeзу рибофлавіну у дріжджів Candida famata, а саме RIB!, RIB2, RIB3, RIB5, RIB6 та RIB7. Сконструйовано інтегративні вектори, що містять промотори структурних генів шляху біосинтезу рибофлавіну RIB!, RIB2, RIB3, RIB5, RIB6 та RIB7 перед репортерним геном LAC4. Iдентифіковано сайт зв’язування Sef1 у межах послідовності промотора гена RIB1. Сконструйовано плазміди. які містять промотор гена RIB1 з модифікованим чи делетованим потенційним сайтом взаємодії з Sef1. У геном дріжджів S. cerevisiae було введено касети, що містять репортерний ген LAC4 Kluyveromyces lactis, який кодує β-галактозидазу, під контролем різних промоторів структурних генів біосинтезу рибофлавіну (RIB-промотори) та ген SEF1 C. famata під контролем GAL1-промотора, що активується галактозою. Отримано трансформанти, S. cerevisiae, що містять всі компоненти моногібридної системи, а саме інтегративні плазміди з RIB1 промоторами і репортерним геном LAC4 та визначено активність β-галактозидази при культивуванні цих трансформантів у середовищі з галактозою (за умов індукції (промотора GAL1), так і з глюкозою (контроль). Отримані результати вказують на те, що транскрипційний фактор Sef1 безпосередньо зв’язується і активує промотор гена RIB1 , а також промотори генів RIB3, RIB6, RIB7, про що свідчить висока активність β-галактозидази у відповідних трансформантів. Транскрипційний фактор Sef1 безпосередньо не взаємодіє з промоторами генів RIB2 та RIB5. Встановлено, що Sef1 зв”язується з послідовністю TAAAAATCCGAACCCCGG, про що свідчить втрата активності β-галактозидази при зміні чи делеції даного сайту.

Опис продукції

Автори роботи

Дзанаєва Любов Сергіївна
Романов Сергій Олексійович
Фаюра Любов Романівна
Цирульник Андрій Олександрович

Додано в НРАТ

2024-12-09