Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0224U033298, (0123U102915) , Науково-дослідна робота Назва роботи Особливості формування і кріоконсервування сфероїдів з клітин головного мозку щурів Назва етапу роботи Визначення морфологічних особливостей клітин, щовиселяються з сфероїдів, сформованих у краплі протягомрізного часу культивування, в процесі їх культивування напідкладці. Дослідження впливу заморожування-відігріву в присутності кріопротектора ДМСО на морфологічну цілісність сфероїдів та на здатність їх клітин прикріплюватися, мігрувати та розпластуватися в культурі. Визначення оптимального часу еквілібрації сфероїдів з кріопротектором ДМСО перед кріоконсервуванням та оптимального методу відмивання кріопротектора після відігріву кріоконсервованих сфероїдів Керівник роботи Всеволодська Світлана Олександрівна, Дата реєстрації 24-12-2024 Організація виконавець Інститут проблем кріобіології і кріомедицини Національної академії наук України Опис роботи Вивчення особливостей формування сфероїдів клітинами тканини головного мозку новонароджених щурів і наступного їх кріоконсервування під захистом проникаючого кріопротектора ДМСО. Опис етапу Об'єкт дослідження – нейральні клітини (НК) мозку новонароджених щурів. Мета роботи - вивчення особливостей формування сфероїдів (СФ) клітинами головного мозку новонароджених щурів і наступного їх кріоконсервування під захистом проникаючого кріопротектора ДМСО. Методи дослідження – ізоляція клітин з мозку новонароджених щурів; моношарове та об’ємне культивування, кріоконсервування, флуоресцентна та світлова мікроскопія, морфометрія. Експериментальні дослідження продемонстрували, що свіжоотримані НК з мозку новонароджених щурів не формують СФ при об’ємному культивуванні методом “висячої краплі”. При цьому прекультивовані НК здатні формувати СФ у краплі, а ефективність сфероїдоутворення залежить від посівної концентрації та строка культивування. Оптимальними умовами для утворення життєздатних СФ є концентрації 12×103, 20×103 і 40×103 прекультивованих НК на краплю об’ємом 20 мкл та строк культивування до 5 діб. При перенесені на адгезивну поверхню СФ здатні прикріплюватися, їх клітини мігрували та формували моношар з морфологією нейральних і гліальних клітин, що свідчить про високу життєздатність СФ та присутність прогеніторних/стовбурових клітин. Встановлено, що лише 55±8 % сфероїдів, кріоконсервованих за стандартним двухетапним протоколом, що включає 15 хв етап еквілібрації проби з 10% ДМСО при +4°С, зберігають свою життєздатність, оцінену в умовах моношарової культури. Теоретично визначено, що оптимальний час для 95 %-го насичення клітин СФ кріопротектором ДМСО перед кріоконсервуванням становить 157 сек при +5C. Визначено оптимальний метод видалення ДМСО з деконсервованих СФ, що включає ступінчасте розведення суспензії до досягнення 0,1%-ої концентрації ДМСО. При такому підході 80% сфероїдів зберігають свою цілісність і здатність прикріплюватися до підклідки з наступною міграцією і диференціацією їх клітин. Опис продукції Автори роботи Всеволодська Світлана Олександрівна Каверінська Анна Ігорівна Додано в НРАТ 2024-12-24 Закрити