Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0225U001684, (0124U001335) , Науково-дослідна робота Назва роботи Розроблення засобу діагностики сибірки методом полімеразної ланцюгової реакції з нециклічною ампліфікацією Назва етапу роботи Створення науково-методичних підходів для виявлення збудника сибірки за допомогою петлевої ізотермічної ампліфікації (LAMP) Керівник роботи Тарасов Олександр Анатолійович, Кандидат ветеринарних наук Дата реєстрації 05-02-2025 Організація виконавець Інститут ветеринарної медицини Національної академії аграрних наук України Опис роботи Розробити на основі методу нециклічної ампліфікації, а саме петлевої ізотермічної ампліфікації (LAMP, loop-mediated amplification) нові підходи для швидкого і ефективного діагностування B.anthracis та встановити чутливість та відтворюваність LAMP методу. Опис етапу  За виконання завдання було розроблено три окремих набора праймерів для проведення LAMP, спрямованих на визначення маркерних ділянок геному збудника сибірки: BA5345 послідовність з хромосоми (номер GenBank № NC003997.3), послідовність lef з плазміди pXO1 (GenBank № M30210.1) та послідовність capB плазміди pXO2 (GenBank № M24150.1) з. Результати досліджень виявили, що оптимальна ампліфікація проходить за температури інкубації 60 °С протягом 30-60 хвилин. Оптимальні концентрації праймерів для аналізу становили 1,6 мкМ для FIP і BIP, 0,8 мкМ для LF і LB та 0,2 мкМ для F3 і B3. Аналітична чутливість LAMP-аналізів складала 100 копій геномної ДНК в реакції. Колориметричний аналіз за кінцевою точкою оцінки LAMP-реакції, визначалась за допомогою інтеркалюючого барвника SYTO16 та розчину барвника феноловий червоний. Під видимим світлом колір в LAMP-позитивних реакціях змінювався на жовтувато-зелений, а в ультрафіолетовому світлі проявляв флуоресценцію. У LAMP-негативних реакціях колір барвника залишався незмінним і барвник не флуоресціював в УФ-світлі. Продукти LAMP на електрофорезі в агарозному гелі показали характерні доріжки очікуваного розміру. Підтверджено достатню чутливість та специфічність праймерів. Тест дозволяє специфічно диференціювати B. anthracis від інших видів Bacillus та інших видів бактерій, та дозволяє застосовувати метод для прямого виявлення збудника у клінічних зразках без проведення мікробіологічного культивування. За результатами досліджень створено "Методичні рекомендації щодо щодо виявлення збудника сибірки за допомогою петлевої ізотермічної ампліфікації (LAMP)" (2024), та подано заявку на Патент України на корисну модель "Спосіб виявлення B.anthracis за допомогою петлевої ізотермічної ампліфікації (LAMP)" (2024) Опис продукції Автори роботи Додано в НРАТ 2025-02-05 Закрити