Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0225U005358, (0124U002158) , Науково-дослідна робота Назва роботи Розроблення засобу діагностики фузаріозу у зерні методом полімеразно-ланцюгової реакції (ПЛР) Назва етапу роботи Створення технологічного регламенту на тест-набір з діагностики фузаріозів зерна методом ПЛР Керівник роботи Захарова Ольга Михайлівна, Кандидат біологічних наук Дата реєстрації 30-12-2025 Організація виконавець Інститут ветеринарної медицини Національної академії аграрних наук України Опис роботи Розробити засіб для діагностики фузаріозів зерна за допомогою методу ПЛР, який сприятиме більш ефективній та ранній діагностиці ураження зернових фузаріозом Опис етапу Оптимізація праймерів і умов ПЛР. На основі послідовностей CAL та TEF генів проведено дизайн 7 праймерних систем, включаючи універсальну пару для визначення роду та 6 видоспецифічних пар. Відпрацьовано оптимальний температурний режим (94–58–72°C), склад реакційної суміші та концентрації PairMix. Перевірено розмір ампліконів (340–600 п.н.) методом електрофорезу. Розробка концепції комплектування тест-набору. Сформовано структуру набору: 2×Hot-Start Master Mix, 7 сумішей праймерів, позитивний і негативний контролі. Дослідження тестових зразків зерна кукурудзи. Виконано ПЛР-аналіз та встановлено, що 55 із 60 ізолятів (91,7%) були позитивними за ДНК Fusarium. Видове типування ізолятів. Для позитивних ізолятів проведено ампліфікацію 6 видоспецифічними праймерами. Отримано розподіл видів: F. sporotrichioides, F. graminearum, F. proliferatum, F. culmorum, F. oxysporum, F. verticillioides. Дані про частоти видів узгоджені з морфологічними характеристиками культур. Перевірка токсиногенності ізолятів. Проведено ТШХ для якісного скринінгу та ІФА (R-Biopharm) для кількісного визначення Т-2 токсину, зеараленону та фумонізину В1. Із 55 ПЛР-позитивних ізолятів 27 (49,1%) проявили токсинопродукування. Побудовано кореляційні матриці між видом та токсином. Дослідження відтворюваності та стабільності реагентів. Проведено контроль серій, тестування позитивного та негативного контролів, аналіз розбіжностей між повторними реакціями (<10%). Оцінено стабільність MasterMix та суміші праймерів у циклі зберігання (−20°C). Удосконалення складу та підготовка технологічного регламенту. Скориговано обсяги фасування сумішей праймерів, оновлено вимоги до контролю якості та збереження реагентів, сформовано остаточну редакцію технологічного регламенту на діагностичний набір. Розроблено технологічний регламент з виготовлення і контролю діагностичного ПЛР-набору для виявлення ДНК грибів роду Fusarium відповідно до вимог ДСТУ ISO/IEC 17025:2019. Опис продукції Автори роботи Захарова Ольга Михайлівна Криця Яна Петрівна Сидоренко Тетяна Володимирівна Янголь Юлія Анатоліївна Моложанова Альона Василівна Додано в НРАТ 2025-12-30 Закрити