Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0824U003309, Дисертація доктора філософії На здобуття Доктор філософії Дата захисту 18-12-2024 Статус Захищена Назва роботи Регуляторна роль позаклітинних везикул за умов норми та канцероґенезу Здобувач Живоложний Артем Юрійович, аспірант Керівник Дробот Людмила Борисівна Керівник Самойленко Анатолій Анатолійович Опонент Клись Юлія Григорівна Опонент Козировська Наталія Олексіївна Рецензент Тихомиров Артем Олександрович Рецензент Колибо Денис Володимирович Опис Позаклітинні везикули (EVs) складають гетерогенну популяцію нано/мікророзмірних мембранних везикул, що постійно секретуються в позаклітинне середовище практично всіма дослідженими типами клітин як за нормальних фізіологічних, так і патологічних станів. EVs містять нуклеїнові кислоти, протеїни з різним функціональним потенціалом, сигнальні молекули та метаболіти, що дозволяє їм відігравати провідну роль у міжклітинній комунікації. Проте, глибина вивчення EVs, що містяться в низці біологічних рідин та продукуються пухлинними клітинами, все ще залишається недостатньою. Тому, метою дисертаційної роботи стало дослідити особливості продукування, молекулярний склад та функціональні властивості EVs, ізольованих з поту людини та кондиціонованого середовища псевдонормальних та пухлинних клітин, з’ясувати вплив нормоксії/гіпоксії й адаптерного протеїну Ruk/CIN85 на зазначені показники. Встановлено, що EVs з поту людини містять DNA та RNA людського (74% зчитувань цих зразків відповідали геному людини (70% - tRNA, інші типи RNA - 18,5%, mRNA - 5%, miRNA - 1,85%) і 29% - неанотованим областям) і мікробного походження (бактерій, архей і вірусів, типових для мікробіому шкіри). Протеїновий склад EVs людського поту та зразків поту, зібраних з альгінатних пластирів продемонстрував присутність 1209 унікальних протеїнів людини, з яких ~ 20% були присутні у кожному індивідуальному дослідженому зразку, маркер екзосом CD63, 846 протеїнів (70%), спільних з загальним потом, і 368 протеїнів (30%) – з альгінатним пластиром, а також 1594 протеїнів бактерійного походження. Вплив гіпоксії на клітини аденокарциноми нирки призводить до посилення секреції EVs й помітних змін їх протеїнового вантажу порівняно з нормоксією. За допомогою LS-MS-аналізу в зразках «гіпоксичних» EVs виявлено надмірну присутність інтегринів, протеїнів, які беруть участь у забезпеченні адгезивності клітин. Вивчення хімічного складу препаратів EVs, що продукуються клітинами аденокарциноми нирки, за допомогою обмеженої в часі Раманівської спектроскопії та підсиленої поверхнею обмеженої в часі Раманівської спектроскопії виявило характерні зміни у амідних областях через зміни хімічних зв’язків у протеїнах EVs за умов гіпоксії. TG-RS та TG-SERS є перспективними безмітковими технологіями для вивчення впливу зовнішніх стимулів (гіпоксія) на склад EVs та відмінностей, що виникають внаслідок використання різних протоколів очищення EVs. Характеристика EVs, з кондиціонованого середовища клітин карциноми нирки миші лінії Renca з надекспресією адаптерного протеїну Ruk/CIN85 (Renca-RukUp) та контрольних клітин Renca-Mock за умов нормоксії та гіпоксії показала, що концентрація частинок, що продукуються клітинами Renca-RukUp, виявилася на порядок вищою за умов гіпоксії у порівнянні з умовами нормоксії. За нормоксії вміст протеїнів Ruk/CIN85, Alix і CD81 зростав у везикулах з клітин Renca-RukUp у порівнянні з клітинами Renca-Mock. За гіпоксії вміст досліджуваних протеїнів зменшувався більш ніж на 2 порядки у EVs з клітин Renca-RukUp, а вміст Ruk/CIN85 і CD81 зростав у EVs з Renca-Mock. Таким чином, Ruk/CIN85 є новим компонентом EVs, що продукуються пухлинними клітинами, який може відігравати регуляторну роль у контролі складу EVs за умов нормоксії та гіпоксії. Характеристика EVs, очищених з кондиціонованого середовища клітин ембріональної нирки людини лінії НЕК293, стабільно трансфікованих вектором ЕGFP-Ruk/CIN85 (НЕК293 ЕGFP-RukUp), продемонструвала, що ЕGFP-Ruk/CIN85 є компонентом EVs, що продукуються клітинами НЕК293 ЕGFP-RukUp, при цьому EVs з надекспресією ЕGFP-Ruk/CIN85 здатні диференційно модулювати проліферативні властивості та рухливість клітин in vitro. Більшість ідентифікованих протеїнів, що диференційно експресуються в клітинах НЕК293 ЕGFP-RukUp і виявляються в EVs, є метаболічними ензимами. EVs, що продукуються пухлинними клітинами аденокарциномних клітин грудної залози миші лінії 4Т1 з надекспресією або зниженою експресією Ruk/CIN85, RukUp та RukDown, відповідно, містять Ruk/CIN85, характеризуються специфічними профілями вмісту його численних молекулярних форм та здатні модулювати проліферативну активність, рухливість і інвазивність клітин 4T1 WT. Таким чином, Ruk/CIN85 є конститутивним компонентом протеїнового складу EVs пухлинних клітин і , залежно від його вмісту в EVs, відіграє активну роль у контролі канцерогенезу. Дата реєстрації 2024-11-01 Додано в НРАТ 2025-01-13 Закрити