Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0212U008715, 0110U006119 , Науково-дослідна робота Назва роботи Створення прототипів тест-систем для ДНК-аналізу перебудов геному, що спричинюють моногенні спадкові патології та спадкову схильність до розвитку найбільш соціально важливих захворювань людини Назва етапу роботи Керівник роботи Лівшиць Людмила Аврамівна, Дата реєстрації 12-02-2013 Організація виконавець Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Опис етапу Метою запропонованого проекту є розробка прототипів тест-систем для аналізу кількості копій гена PMP22 (делеції/дуплікації) у хворих із демієлінізуючою моторно-сенсорною поліневропатією (ШМТ1) та мажорних мутацій в гені CYP21A2 у хворих на адреногенітальний синдром (АГС), які є придатними для пре- і постнатальної діагностики різних типів досліджуваних захворювань, а також встановлення безсимптомного гетерозиготного носійства в родинах високого ризику АГС (аутосомно-рецесивний тип успадкування) та ранньої досимптомної діагностики ШМТ1 (аутосомно-домінантний тип успадкування). Проведено дизайн і синтез специфічних праймерів для ампліфікації in vitro послідовностей досліджуваного гена РМР22 (3-й екзон) та референсного гена ALB (12-й екзон), а також відпрацьовано оптимальні умови кількісної ПЛР у реальному часі із флюотесцентним інтеркалюючим барвником Sybr Green досліджуваних геномних послідовностей. Також здійснено дизайн та синтез специфічних праймерів і відпрацьовані оптимальні умови ПЛР для аналізу мутацій гена CYP21A2: протяжної делеції гена CYP21A2, мутацій P30L, I2G, I172N, E6cluster, R356W - методом алель специфічної ПЛР; а також мутації V281L, Q318X - методом аналізу поліморфізму довжини рестрикційних фрагментів амплифікованих in vitro послідовностей даного гена. Розроблені методики апробовані на референсних зразках ДНК з відповідними мутаціями, аналіз яких проводився незалежно альтернативними методами. На основі розроблених методик створені прототипи тест-систем для ДНК-діагностики зазначених патологій, які не потребують коштовного обладнання та можуть бути впроваджені в спеціалізованих закладах охорони здоров'я України. Ключові слова: прототип тест-системи, спадкова поліневропатія Шарко-Марі-Тус, адреногенетальний синдром, ДНК-діагностика, ПЛР, мутація, делеція, дуплікація, кількісна ПЛР в реальному часі. Опис продукції 1. Розроблено та апробовано прототип тест-системи для визначення делецій/дуплікацій гена РМР22 за допомогою кількісної ПЛР у реальному часі, яку можна використовувати для пре- та постнатальної (пресимптоматичної) ДНК-діагностики спадкових демієлінізуючих поліневропатій в родинах високого ризику даної патології. 2. Розроблено та апробовано прототип тест-системи для аналізу протяжної делеції гена CYP21A2 та мутацій P30L, I2G, I172N, E6cluster, R356W методом алель специфічної ПЛР, а також мутації V281L, Q318X методом аналізу поліморфізму довжини рестрикційних фрагментів. Автори роботи Грищенко Наталія Володимирівна Кравченко Сергій Афанасійович Пампуха Володимир Миколайович Перевера Марія Павлівна Содоль Раїса Іванівна Соловйов Олександр Олександрович Татарський Павло Феліксович Чернушин Сергій Юрійович Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити