Реєстраційний номер
0223U002012,
0122U000856
, Науково-дослідна робота
Назва роботи
Кріоконсервування сфероїдів зі стовбурових/прогеніторних клітин різного гістогенетичного походження на основі фізико-математичного моделювання.
Назва етапу роботи
Керівник роботи
Петренко Олександр Юрійович, Доктор біологічних наук
Дата реєстрації
07-02-2023
Організація виконавець
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини Національної академії наук України
Опис етапу
Об'єкт дослідження – осмотичні характеристики гомогенних та гетерогенних сфероїдів (СФ), отриманих з клітин різного гістогенетичного походження (мезодермального – мезенхімальні стовбурові клітини (МСК) дорослої людини та лінія L929 фібробластоподібних клітин миші; ектодермального – нейральні клітини (НК) мозку новонароджених щурів та похідні нервового гребеню зі спінальних гангліїв новонароджених поросят). Мета роботи – встановити основні параметри сфероїдоутворення та морфофункціонального профілю для гетерогенних сфероїдів зі стовбурових/прогеніторних клітин та визначити їхні осмотичні характеристики у розчинах кріопротектору диметилсульфоксиду (ДМСО). Теоретично розраховані коефіцієнти фільтрації Lp та коефіцієнти проникності kp для води та ДМСО для ряду біооб’єктів (клітин, СФ, клітин в залежності від локалізації у СФ). З’ясовано, що для клітин лініі L929 коефіцієнти Lp і kp є найбільшими для клітин в суспензії та зменшуються для клітин у складі сфероїда зі збільшенням глибини їх розташування. Розраховані оптимальні режими кріоконсервування СФ з клітин L929 в залежності від термінів культивування. Визначені необхідні умови для утворення сфероїдів з МСК і встановлені такі параметри: поверхнево-об’ємне відношення, осмотично неактивний об’єм, коефіцієнти Lp та kp для молекул води і кріопротектору ДМСО, значення енергії активації їх проникання. За розрахунками фізико-математичного моделювання визначений діапазон оптимальних швидкостей охолодження сфероїдів, отриманих з МСК ‒ 0,75 ÷ 1 град/хв, рекомендованою концентрацією ДМСО є 7.5 % (1 М). Визначено оптимальну посівну концентрацію (3-3,5x106 клітин/мл) та доведена необхідність прекультивовання протягом 3-5 діб для ефективного утворення СФ з НК. Встановлено, що ефективність сфероїдоутворення з клітин-похідних нервового гребеня підвищується у разі попереднього отримання моношарової культури при використанні живильного середовища з 10 % ФТС та наступного пасажу у середовище із замінниками сироватки Нейромакс або В27.
Опис продукції
Автори роботи
Алабедалькарім Наталія Михайлівна
Божок Галина Анатоліївна
Всеволодська Світлана Олександрівна
Гордієнко Ольга Іванівна
Коваленко Ігор Федорович
Коваленко Світлана Євгенівна
Лєгач Євген Іванович
Мазур Світлана Петрівна
Моісеєва Наталія Миколаївна
Оченашко Ольга Вадимівна
Ревенко Олена Борисівна
Рогульська Олена Юріївна
Сидоренко Ольга Сергіївна
Сукач Олександр Миколайович
Труфанова Наталія Анатоліївна
Додано/оновлено в НРАТ
2023-02-07
