Реєстраційний номер
0212U009017,
0112U008186
, Науково-дослідна робота
Назва роботи
Роль адаптерного білка Ruk/CIN85 в розвитку патологічних станів нервової системи людини.
Назва етапу роботи
Керівник роботи
Биць Надія Вікторівна,
Дата реєстрації
26-12-2012
Організація виконавець
Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна
Опис етапу
В результаті проведеної роботи були отримані стабільно трансфіковані клональні популяції клітин феохромоцитоми щура лінії PC12 з надекспресією Ruk/CIN85, зв'язаного з зеленим флуоресцентним былком GFP. Рівень експресії GFP-Ruk/CIN85 аналізувалили за допомогою Вестерн-блот аналізу та конфокальної мікроскопії. Встановлено, що клітини PC12/GFP-Ruk/CIN85 характеризуються здатністю до формування кластерів і до клонального росту. Виявлено, що у клітинах PC12/GFP-Ruk/CIN85 повністю блокується здатність до диференціювання за нейрональним типом, тоді як клітини дикого типу в середовищі з низьким вмістом сироватки після додавання NGF формували відростки, подібні до відростків нейронів симпатичної нервової системи. Крім того, надекспресія Ruk/CIN85 призводила до конститутивної активації протеїнкінази В (Akt) та до посилення активації ERK1/2 при дії NGF. В EGFP-Ruk-надекспресуючих клітинах спостерігався високий рівень експресії Id1 та низький рівень експресії MATH2/NEUROD6 порівняно з контрольними клітинами.
Опис продукції
Трансфіковані клональні популяції клітин феохромоцитоми щура лінії PC12 з надекспресією Ruk/CIN85, зв'язаного з зеленим флуоресцентним былком GFP. Рівень експресії GFP-Ruk/CIN85 аналізувалили за допомогою Вестерн-блот аналізу та конфокальної мікроскопії. Встановлено, що клітини PC12/GFP-Ruk/CIN85 характеризуються здатністю до формування кластерів і до клонального росту. Виявлено, що у клітинах PC12/GFP-Ruk/CIN85 повністю блокується здатність до диференціювання за нейрональним типом, тоді як клітини дикого типу в середовищі з низьким вмістом сироватки після додавання NGF формували відростки, подібні до відростків нейронів симпатичної нервової системи. Крім того, надекспресія Ruk/CIN85 призводила до конститутивної активації протеїнкінази В (Akt) та до посилення активації ERK1/2 при дії NGF. В EGFP-Ruk-надекспресуючих клітинах спостерігався високий рівень експресії Id1 та низький рівень експресії MATH2/NEUROD6 порівняно з контрольними клітинами.
Автори роботи
Биць Надія Вікторівна
Пасічник Ганна Володимирівна
Поворознюк Ольга Олександрівна
Додано/оновлено в НРАТ
2020-04-02
