Реєстраційний номер
0226U001533,
(0124U000667)
, Науково-дослідна робота
Назва роботи
Розроблення тест-системи для виявлення генетичного матеріалу збудника сибірки на основі кількісної ПЛР та рекомбінантних технологій з метою удосконалення системи контролю захворювання в умовах збройної агресії рф та повоєнного відновлення України
Назва етапу роботи
Розроблення тест-системи для виявлення генетичного матеріалу збудника сибірки на основі кількісної ПЛР та рекомбінантних технологій з метою удосконалення системи контролю захворювання в умовах збройної агресії рф та повоєнного відновлення України
Керівник роботи
Білойван Олександр Володимирович, Кандидат ветеринарних наук
Дата реєстрації
27-01-2026
Організація виконавець
Національний науковий центр "Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини"
Опис роботи
Метою проєкту є створення тест-системи для виявлення ДНК збудника сибірки у біологічному матеріалі та пробах із навколишнього середовища методом ПЛР. В основі тест-системи планується використання рекомбінантних позитивних контрольних зразків специфічних ДНК-фрагментів збудника сибірки, а саме хромосомного маркера dhp61, фрагмента гена pagA плазміди pXO1та фрагмента capC плазміди pXO2 Bacillus anthracis. Буде оптимізовано параметри ампліфікації, а також концентрації компонентів реакційної суміші, будуть визначені коефіцієнти варіації в межах одного та декількох незалежних експериментів, буде установлено аналітичну, діагностичну чутливість і специфічність методу.
Опис етапу
У роботі проведено розроблення ключових компонентів ПЛР тест-системи «Anthrax-DNA-test» для виявлення генетичного матеріалу Bacillus anthracis. Створено рекомбінантний позитивний контрольний зразок для детекції хромосомного маркера dhp61 методом TA-клонування з використанням клітин E. coli DH5α та вектору pTZ57R/T. Ідентичність та коректність вставки підтверджено гель-електрофорезом, секвенуванням і ПЛР у режимі реального часу.
Також отримано внутрішній контрольний зразок (qPCR IC) шляхом клонування фрагмента гена GFP, що дає змогу запобігати хибно негативним результатам під час ампліфікації. Обидва контролі, а також виготовлені раніше рекомбінантні зразки для виявленння плазмідних маркерів збудника сибірки pagA та capC включено до складу експериментального набору ПЛР тест-системи разом із системами праймерів та зондів для детекції зазначених фрагментів ДНК.
Проведено повний комплекс валідаційних випробувань: визначення аналітичної чутливості, специфічності та відтворюваності методики. Оптимізовано температурні режими та концентрації компонентів реакційної суміші, встановлено робочі параметри MgCl₂, праймерів, зонда та Taq-полімерази. Показники варіації (CV) у межах серії та між експериментами становили 0–2,9 %, що відповідає міжнародним вимогам і свідчить про високу точність тест-системи.
Лінійність ПЛР-РЧ підтверджена коефіцієнтами кореляції R² = 0,9992–0,9999, що демонструє пряму залежність сигналу від концентрації ДНК. Специфічність перевірено на штамах роду Bacillus і збудниках інших інфекцій — перехресних реакцій не виявлено.
Сформовано попереднє реєстраційне досьє на тест-систему. За показниками чутливості, специфічності й відтворюваності «Anthrax-DNA-test» не поступається закордонним аналогам та відповідає вимогам ВООЗт. Після реєстрації її планується використовувати для експрес-діагностики сибірки в Україні.
Опис продукції
Автори роботи
Болотін Віталій Ігорович
Дідик Тетяна Борисівна
Додано/оновлено в НРАТ
2026-01-27
